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                                                              琉璃苣油
                                                              小麦胚芽油
                                                              石榴籽油
                                                               
                                                              保健常识 >> ω-3脂肪酸的抗癌依据
                                                              ω-3脂肪酸的抗癌依据
                                                              更新时间:2010-11-15 15:23:19  查看:4480次

                                                                  ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 Polyunsaturated fatty acid,ω-3PUFA)是一类主要来源于海洋生物的重要营养素,与机体脂类代谢等过程密切相关。由于可以显著降低血浆甘油三酯(TAG)?#22270;?#20302;密度脂蛋白(VLDL)水平,提高高密度脂蛋白(HDL)水平,?#31181;?#34880;小板血栓素A_2(TXA_2)的生成等作用,临床上已应用于抗血栓等心血管病的治疗。研究发现ω-3PUFA可以在体内外通过多种方式有效?#31181;?#32959;瘤细胞的增殖和转移,临?#20179;?#30244;患者大剂量应用ω-3PUFA也未见严重的毒副作用,因此有望成为新型的防癌抗癌药物。过氧化物酶体增殖物激活受体(Peroxisome proliferator-activated receotors,PPARs)的发现进一步阐明了ω-3 PUFA众多生物学效应的一个重要机制。作为高亲和力配体,ω-3PUFA可以通过激活此胞内受体,调控众多带有PPAR反应元件(Peroxisome proliferator responsive element,PPRE)基因的表达,诱导众多细胞事件的发生。 跨膜型肿瘤坏死因?#24212;?Transmembrane tumor necrosis factor ?#31890;瑃mTNF α)是一种具有多种生物学功能的细胞因子,由多种活化的免疫细胞产生,依赖细胞间的直接接触,通过激活细胞膜TNF受体(TNF receptor, TNFR)发挥细胞毒性作用。

                                                                   研究发现tmTNF?#37327;?#20197;?#31181;?#22810;种肿瘤细胞增?#24120;?#32780;且与?#32622;?#22411;肿瘤坏死因?#24212;?Secreted TNF?#31890;瑂TNFα)相比,具有更广泛的杀瘤谱和更强的诱导凋亡作用,因此在肿瘤治疗研究中具有重要的应用价值。 基因治疗的临床研究表明,在目的基因上游建立一个有效的“基因开关”(gene switch),通过药物或激素等外源因子,使该调控系统准确地控制目的基因定时、定量和定位转录表达,能够提高基因治疗的准确性、特异性和有效性.

                                                                  在本课题中,首先运用DNA重组技术和真核细胞转染技术,使肿瘤细胞在ω-3PUFA诱导下高效稳定表达外源性的tmTNF ?#31890;?#28982;后以细胞凋亡事件为主要研究内容,?#25945;至?#32773;协同作用对肿瘤细胞的影响及相关机制,为进一步了解ω-3PUFA和tmTNF α抗肿瘤机制?#32422;?#20020;床应用提供一定的理论依据。

                                                                   为此,本研究首先构建带有PPRE-tk启动子片段的增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因载体,证明了通过这个特异的启动子片段,ω-3PUFA可以诱导下游靶基因高效表达,并呈一定的时间、剂量依赖关系。 第三军医大学硕士学位论文 在此基础上进一步构建带有相同PPRE调控元件的tmTNFQ真核表达载体,以人白 血病HL一60细胞和?#27204;?#30284;MCF一7细胞为研究对象,建立稳定转染重组载体的肿瘤细胞 株,应用RT一PCR和免疫荧光细胞化学方法检测。一3PUFA对转染细胞外源性tmTNF。 表达的调控。采用细胞生长曲线测定、MTT比色实验、流式细胞?#27835;?#21644;DNA梯?#26410;?#26816; 测等技术观察。一3PUPA对转染和未转染pPPRE一tmTNF“表达载体的肿瘤细胞增殖功 能、细胞周期和凋亡的影响;通过RT一PCR和蛋白印迹等技术检测细胞casPase家族表 达的变化,应用caspase一8特异性底物Ac一IETD一AMC检测肿瘤细胞casPase一8活性的变 化,用casPase一8特异性?#31181;萍罙c一IETD一CHO检测其?#28020;?#19968;3 PUFA协同外源性tmTNF 。?#31181;?#32959;瘤细胞增殖和诱导凋亡的拮抗作用。

                                                                  主要实验结果和结论如下:

                                                                 1.运用DNA重组技术构建带有PPRE一tk调控元件的tmTNFQ真核表达载体,建立 稳定转染的HL一60和MCF一7细胞株。经RT一PCR和荧光免疫细胞化学检测发现转染细 胞表达的外源性t切LTNFQ基因产物定位于细胞膜,经。一3PUFA处理后mRNA和蛋白表 达显著增加,呈一定的时间、剂量依赖关系,说明。一3PUFA可调控的tmTNFa真核表 达载体构建成功。 2.PPPRE.tmTNF。转染和未转染的HL~60和MCF-7细胞经。一3PUFA处理后,增殖 功能均受?#31181;疲?#20854;中HL一60细胞周期被阻滞在G夕G,期、细胞凋亡率增加、可检测到 DNA梯?#26410;?#36716;染细胞上述变化更为显著。一3PUFA对MCF一7细胞细胞周期及凋亡 率未见明显影响,而转染PPPRE一tm侧F。的MCF一7细胞己经出现细胞凋亡事件,经一3PUFA处理后凋亡效应更为显著。这些结果说明。一3PUFA协同外源性tmTNFQ基因 产物可以更为有效的?#31181;?#32959;瘤细胞增?#24120;?#20419;进细胞凋亡。

                                                                  3.pppRE一tmTNFQ转染和未转染的HL一60细胞经。一3PUFA处理后,可见细胞 easpase一l、s和9 mRN^和蛋白表达增加,easpase一8活性增高,转染细胞上述变化 更为明?#28020;?#19968;3Pu队对MCF一7细胞casPase表达和活性未见明显影响;转染 PPPRE一tmTNF。的McF一7细胞可?#32422;?#27979;到casPase一8活性的增强,经一3PUFA处理后 easpase一1、8和9表达和活性明显增加(M CF-7细胞缺失easpase一3),凋亡效应更为显著。 应用casPase?#31181;萍?#33021;部分拮抗。一3PUFA和/或tmTNF“对肿瘤细胞诱导凋亡和?#31181;?#22686; 殖的作用。以上结果说明caspase途?#23545;?#19968;3PUFA和域tmTNF“诱导的肿瘤细胞凋亡中可能发挥重要作用,根据caspase凋亡机制的不同,推测TNFR介导的细胞凋亡效应 和线粒体依赖的凋亡途径可能是:一3PUFA协同tmTNFQ诱导肿瘤细胞凋亡的主要相关机制。

                                                                  综上所述。一3 PUFA协同外源性 tmTNFQ可以更为有效的诱导肿瘤细胞凋亡,?#31181;?#32454;胞增?#24120;?#19982;TNFR和/或线粒体相关的casPase级联调控网络可能与这个细胞凋亡。

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